
دانشگاه شیراز
دانشکده علوم
پایان نامه ی کارشناسی ارشد رشته فیزیولوژی جانوری
عنوان:
بررسی اثر بربرین روی آسیبهای عملکردی و بافتی بیضه به دلیل مشکل زیاد کلیوی القاء شده به وسیله ایسکمی ریپرفیوژن در رتهای نر
استادراهنما:
دکتر فیروزه غلام پور
شهریور92
واسه رعایت تکهایی از متن پایان نامه مثلا :
(ممکنه هنگام انتقال از فایل اصلی به داخل سایت بعضی متون به هم بریزه یا بعضی نمادها و اشکال درج نشه ولی در فایل دانلودی همه چیز منظم و کامله)
چکیده
بررسی اثر بربرین روی آسیبهای عملکردی و بافتی بیضه به دلیل مشکل زیاد کلیوی القاء شده به وسیله ایسکمی ریپرفیوژن در رتهای نر
آسیب اندام دوردست یه جور استرس اکسیداتیوه كه ممكنه در اندامهای جور واجور دور از بافت در خطر قرار گرفته با آسیب ایسکمی/ ریپرفیوژن (I/R) دیده شه
درجه آسیب به مدت ایسکمی بستگی داره
لیكن درزمان دوره ریپرفیوژن كه با شروع كردن واكنش التهابی با دخالت رادیكالهای آزاد اکسیژن آسیب رو زیاد میکنه، آشكار میشه بربرین، یک آلکالوئید ایزوکوئینولین مهم، مهارکننده قوی التهابه
هدف از این تحقیق بررسی تغییرات کارکرد تولیدمثلی به دلیل مشکل زیاد کلیوی ایسکمیک و اثر بربرین بر آسیبهای القاء شده در بیضه رت بود
رتهای نر نژاد ویستار (300-260 گرم) به چار گروه (7n=) تقسیم شدن، كه در اون رتها به مدت 7 روز قبل از القاء ایسكمی، بربرین رو به میزان mg/kg/day15 در گروه I/R+Ber و آب مقطر در گروهI/R ، به شکل خوراكی دریافت میكردند
در گروههای Sham و Sham+Ber شریانهای كلیوی بسته نمیشدن و به مدت 7 روز قبل از جراحی به ترتیب آب مقطر و بربرین دریافت میكردند
ایسکمی کلیوی با انسداد هر دو شریان کلیوی به مدت 45 دقیقه ایجاد گردید كه به دنبال اون 24 ساعت ریپرفیوژن انجام شد
نمونههای خونی جهت اندازهگیری غلظت پلاسمایی کراتینین، نیتروژن اوره، تستوسترون، هورمون لوتئینی (LH) و هورمون محرک فولیکول (FSH) جمعآوری گردید
بعد هردو بیضه جدا و جهت بررسیهای بعدی هیستولوژیك (رنگ امیزی هماتوكسیلین و ائوزین) حفظ شدن
ایسکمی/ ریپرفیوژن باعث کاهش معنی دار کارکرد کلیه که با افزایش غلظت کراتینین و نیتروژن اوره پلاسما مشخص شد، کاهش غلظت تستوسترون و افزایش غلظت LH و FSH پلاسما و هم آسیبهای بافت بیضه گردید
تیمار با بربرین افزایش سطح پلاسمایی کراتینین و نیتروژن اوره، کاهش غلظت تستوسترون و هم افزایش LH و FSH پلاسما رو برعکس نمود
هم اینکه، آسیبای هیستولوژیک بیضه رو تا حدودی کم کرد
این یافته های نشون میدهند كه مشکل زیاد کلیوی ایسکمیک مشکلات عملکردی و آسیبهای بافتی رو در بیضه رت القاء میکنه، که با استفاده از بربرین این آسیبها کاهش مییابند
لغات کلیدی: مشکل زیاد کلیوی ایسکمیک ، بربرین، بیضه، هورمون لوتئینی، هورمون محرک فولیکول
فهرست مطالب
عنوان صفحه
1-1- مقدمه واهداف
2
1-2- مشکل حادکلیوی
5
1-2-1-تعریف
5
1-2-2-اتیولوژی
5
1-3- پاتوفیزیولوژی مشکل زیاد کلیوی
5
1-4- سیستم تولید مثلی در جنس نر
6
1-4-1- هیستولوژی بیضه
6
1-4-2- محور هیپوتالاموس_هیپوفیز_بیضه
7
1-4-3- تنظیم عمل سلولهای لایدیگ
8
1-4-4- تنظیم عمل سلول سرتولی
8
1-5- اثرات مشکل کلیوی بر تولیدمثل جنس نر
9
1-6- بربرین
10
1-6-1- اثرات درمانی بربرین
11
1-6-2- اثرات بربرین روی بیضه
11
1-6-3- اثرات بربرین روی کلیه
12
1-7-هدف
13
2– 1- مواد لازم 15
2–2- وسایل لازم 16
2-3- گروههای آزمایشی
16
2-4- روش آماده سازی حیوانات
17
2-5- قرارداد آزمایش
18
2-6– اندازهگیری غلظتهای کراتینین و اوره پلاسما 19
2-7- اندازهگیری غلظت هورمونهای جنسی و بررسی هیستوپاتولوژی بیضه
19
2-8- روش آماده سازی جهت رنگ آمیزی با هماتوكسیلین-ائوزین
20
2-9- روشهای آماری
20
یافته های
22
3-1- مقایسه یافته های پلاسمایی
22
3-1-1- کراتینین پلاسما (طبق میلیگرم در دسیلیتر) 22
3-1-2- نیتروژن اوره پلاسما (طبق میلیگرم در دسیلیتر) 24
3-1-3-تستوسترون پلاسما (طبق نانوگرم در میلیلیتر) 25
3-1-4- هورمون لوتئینی ( (LHپلاسما (طبق نانوگرم در میلیلیتر) 27
3-1-5- هورمون محرک فولیکولی (FSH) پلاسما (طبق نانوگرم درمیلیلیتر) 28
3-2- مقایسه یافتههای هیستوپاتولوژی
30
4-1- بحث
36
4-2- نتیجه گیری
39
4-3- پیشنهادات واسه تحقیقات آینده 39
منابع
40
فهرست جدول
عنوان صفحه
جدول 3-1 مقادیر کراتینین پلاسما در گروههای جور واجور
23
جدول 3-2 مقادیر نیتروژن اوره پلاسما در گروههای جور واجور
24
جدول 3-3 مقادیر تستوسترون پلاسما در گروههای جور واجور
26
جدول 3-4 مقادیر LHپلاسما در گروههای جور واجور
27
جدول 3-5 مقادیر FSHپلاسما در گروههای جور واجور
29
فهرست تصاویر
عنوان صفحه
شکل 1-1 ساختار بیضه
7
شکل 1-2 محور هیپوتالاموس_هیپوفیز_بیضه
9
شکل 1-3 ساختار شیمیایی بربرین
11
شکل 2-1 جداسازی شریان و ورید کلیه جهت کلامپ کردن شریان
18
شکل 3-1- مقایسه وضعیت توبولا و سلولای لایدیگ و فضای بینابینی توبولهای سمینیفر بیضه در گروههایI/R+BBR(D, I/R(C , Sham+BBR(B , Sham(A
32
شکل 3-2- مقایسه ضخامت غشای پایه توبولهای سمینیفر بیضه در گروههای
33
I/R+BBR(D , I/R(C , Sham+BBR(B , Sham(A
33
شکل 3-3 مقایسه درصد اسپرماتوژنز توبولهای سمینیفر بیضه در گروههای
34
I/R+BBR(D , I/R(C , Sham+BBR(B , Sham(A
34
فهرست نمودار
عنوان صفحه
نمودار 3-1 مقایسه مقادیر کراتینین پلاسما 23
نمودار 3-2 مقایسه مقادیر نیتروژن اوره پلاسما 25
نمودار 3-3 مقایسه مقادیر تستوسترون پلاسما 26
نمودار 3-4 مقایسه مقادیر LHپلاسما 28
نمودار 3-5 مقایسه مقادیرFSH پلاسما 29
جدول 3-6 درصدحجمی لومن توبول سمینیفر(درصد اسپرماتوژنز) در گروههای جور واجور
31
فصل اول
مقدمه
1-1- مقدمه واهداف
یکی از علل شایع مشکل زیاد کلیوی [1]((ARF ایسکمیه که اگه به مدت کافی بمونه باعث ایجاد آسیب در توبولهای کلیوی میشه و در آخر مشکل در کارکرد جذبی و ترشحی توبولها و توانایی تغلیظ کنندگی ادراری کلیه، ایجاد نا آرومی و آسیب سلولهای اندوتلیالی عروق دور و بر توبولهای ناحیه مدولای خارجی که خود موجب کاهش جریان خون و احتقان عروق این ناحیه میشه
هم اینکه کاهش در فیلتراسیون گلومرولی از مشکلات همودینامیکی کلیه میباشه ]1
[
دلایل بالینی گذشته نشون میبده که آسیب زیاد کلیوی تنها شاخصی واسه شدت مریضی نیس بلکه از راه ساختارهای التهابی شامل مهاجرت نوتروفیلها، بیان سایتوکاینها و افزایش استرس اکسیداتیو باعث ایجاد مشکل کارکرد در چند اندام دیگه مثل کبد، مغز، قلب، ریها و رودهها هم میشه ]2[
آسیب ایسکمی باعث افزایش بیان مولکولهای چسبندگی و تولید واسطههای التهابی مثل سایتوکاینها و کموکاینها به وسیله اندوتلیوم عروق و توبولها شده که باعث جذب لوکوسیتا به کلیه میشن
مولکولهای چسبندگی سلولی [2](CAMs) مولکولهایی هستن که بافتای بدن رو در کنار هم نگه میداره و در اتصال لوکوسیتها به سلولهای اندوتلیال نقش دارن
مولکولهای چسبندگی مثل اینتگرین و سلکتین در امتداد سایتوکاینهای پیش التهابی آسیب سلولی رو افزایش میدهند ]6،4،3
[
سایتوکاینها گروهی از پروتئینها که به وسیله گلبولهای سفید و یا دیگه سلولها در جواب به بعضی محرکها ترشح میشن و در یه جواب ایمنی موثر برهم عمل پیچیده بین سلولهای لنفاوی و التهابی و خونساز رو بر عهده دارن
شامل چند زیر گروه اینترلوکینها، کموکاینها، اینترفرونها وTNF[3] هستن
مولدین اصلی سایتوکاینها سلولهای لنفوسیت Tکمکی (Th )، سلولهای دندرتیک و ماکروفاژها هستن ]5 [
کموکاینها، پلی پپتیدهای کوچیک ان که به طور انتخابی چسبندگی کموتاکسی و فعال سازی خیلی از جمعیتهای لکوسیتی رو کنترل میکنن
تنظیم کنندههای اصلی عبور و مرور لکوسیتیان
با فعالیتهای سایتوکاینهای التهابی مثل TNF-α عرضه کموکاینهای التهابی افزایش یافته و از راه القای چسبندگی لوکوسیتها به اندوتلیوم عروق موجب حرکت اونا به داخل بافت میشن
بعضی سایتوکاینها مثل TNF_α و اینترلوکین-1 (IL_1) که در جواب التهابی زیاد و طولانی شرکت میکنن باعث افزایش القاء عرضه مولکولهای چسبندگی اندوتلیوم عروق میشن
مثلا TNF-α عرضه سلکتین E، IL_1 و بیان ICAM_1 و VCAM_1 رو تحریک میکنن
حال لوکوسیتهای در گردش این مولکولها رو روی دیواره عروق شناسایی و به اونا وصل میشن و از خلال دیواره عروق به طرف فضاهای بافتی مهاجرت میکنن
در مراحل ابتدایی جواب التهابی اکثریت سلولهای نفوذ یافته به بافت آسیب دیده نوتروفیلها میباشن ] 5
[
از مهمترین فاکتورهایی که در پیشرفت آسیب ایسکمی ری پرفیوژن کلیوی نقش داره میتوان به گونههای واکنشگر اکسیژن [4](ROS) اشاره کرد
رادیکالهای آزاد اکسیژن اتحاد بافت رو از راه لیپیدپراکسیداسیون که ساختارهای سلولی، پروتئینا، لیپیدا و اسیدهای نوکلئیک رو تخریب کرده و با آسیب رساندن به غشاهای سلولی باعث آزادشدن اجزای سلولی شده و پس آسیب بافتی به دلیل ایسکمی رو زیاد میکنه ]4[
لوکوسیتها با کموکاینها (که با ROSافزایش مییابند) و با سایتوکاینهای پیش التهابی مثل TNF-α و اینترلوکین -1 (IL-1) و
فعال میشن ]5
[
در ایسکمی ریپرفیوژن کلیوی بیان لیپواکسیژنازها (LOXs) و سیکلواکسیژنازها (COXs) به ویژهCOX2 بر سلولهای اندوتلیال زیاد مییابد
هم اینکه مالونیلدیآلدهید (MDA) محصول آخر لیپیدپراکسیداسیون افزایش و سوپراکسید دسموتاز (SOD) جاروب کننده رادیکالهای اکسیژن که محافظ سلولها بر علیه آسیب هستن کاهش مییابد ]21
[
از دیگه حوادثی که طی ایسکمی و استرس اکسیداتیو رخ میبده استرس میتوکندریایی و استرس شبکه اندوپلاسمیه که هر دو راه باعث فعال کردن کاسپاز3[5](مارکر آپوپتوزی ) و پس افزایش calpain و در آخر آپوپتوز سلولها میشه] 5[
در ایسکمی کلیوی آنزیم نیتریک اکساید سنتتاز قابل القاء (iNOS) در ایجاد و جلو بردن مشکلات در کارکردهای همودینامیک و دفعی کلیه در ساعات ابتدایی بعد از ایسکمی نقش مهمی داره
شرایط ایسکمی ریپرفیوژن موجب القاء ایزوفرم iNOS شده و به دنبال اون سنتز نیتریک اکساید (NO) افزایش مییابد
NO با آنیونهای سوپراکسید عکس العمل و تشکیل پروکسی نیتریت میبده که به بافت کلیه آسیب میرساند هم اینکه با مهار ایزوفرم نیتریک اکساید سنتتاز اندوتلیالی ((eNOS در جهت افزایش انقباض آرتریولها و پس کاهش جریان خون کلیوی و میزان فیلتراسیون گلومرولی هم نقش داره ]4
[
پس بطور خلاصه در روند ریپرفیوژن، سایتوکاینهای التهابی نظیرTNF_α وIL_1 باعث ظهور مولکولهای اتصالی در سطح اندوتلیوم عروق میشن و باعث ورود سلولهای التهابی به ویژه نوتروفیلها به بافت ایسکمیک شده و با تولید میلوپراکسیداز و عکس العمل بین NO و رادیکالهای سوپراکسید، مراحل استرس اکسیداتیو رو ایجاد میکنه که باعث خیلی بد تر شدن آسیب ایسکمیک میشن
تعداد صفحه : 59
قیمت : 14700 تومن